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螞蟻淘/YF<sup>?</sup>488-Annexin V/PI 細(xì)胞凋亡試劑盒/10T/Y6002S
  • 螞蟻淘/YF<sup>?</sup>488-Annexin V/PI 細(xì)胞凋亡試劑盒/10T/Y6002S

螞蟻淘/YF?488-Annexin V/PI 細(xì)胞凋亡試劑盒/10T/Y6002S

價格: ￥234.00 市場價: 390.00
貨號: Y6002S
品牌: ebiomall
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      組分

      規(guī)格

      Y6002S（10T）

      Y6002M（50T）

      Y6002L（100T）

      A. 1×Annexin V 結(jié)合緩沖液

      10 mL

      50mL

      50 mL×2

      B. YF?488-Annexin V

      50 μL

      250 μL

      500 μL

      C. PI

      100 μL

      500μL

      1mL

      儲存條件4℃避光冷藏，請勿凍存。有效期見外包裝光譜特性
      YF?488-Annexin V: Ex/Em = 490/515 nmPI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA) 產(chǎn)品介紹YF?488-Annexin V和PI凋亡試劑盒提供了一種快速簡便的方法，通過標(biāo)記早期凋亡細(xì)胞（綠色）和壞死細(xì)胞（紅色），用于檢測細(xì)胞凋亡水平。產(chǎn)品可以使用流式細(xì)胞儀或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。YF?488-Annexin V 可以標(biāo)記凋亡細(xì)胞。Annexin V 選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱 PS)。在細(xì)胞發(fā)生早期凋亡時，磷酯酰絲氨酸會外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。用綠色熒光探針 YF?488 標(biāo)記的 Annexin V，即YF?488-Annexin V，可以結(jié)合外翻的磷酯酰絲氨酸，從而檢測細(xì)胞凋亡的重要特征。我們公司的 YF?488 染料與熒光素/FITC 相比，熒光亮度更高，且不受環(huán)境中 pH 的影響，具有良好的光穩(wěn)定性。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種 DNA 結(jié)合染料，它可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞的細(xì)胞核。PI 可以由 488，532 或 546 nm 的激光激發(fā)，呈現(xiàn)紅色熒光。注意事項1. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
      說明書：UE-Y6002S/Y6002M/Y6002L
      MSDS：MSDS Y6002 YF?488-Annexin V&PI
      客戶使用反饋：
      常見問題解答：◆為何染色結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率過高？

      1. 凋亡時間處理過長，使細(xì)胞全部死亡。建議重新摸索細(xì)胞凋亡條件，使細(xì)胞處于不同的凋亡狀態(tài)。2. 對于貼壁細(xì)胞，胰蛋白酶消化時間過長或機(jī)械刮擦細(xì)胞會暫時破壞質(zhì)膜，使Annexin V能夠與細(xì)胞膜胞內(nèi)面上的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，導(dǎo)致假陽性染色。建議在胰蛋白酶消化或機(jī)械刮擦細(xì)胞后，讓細(xì)胞在最佳細(xì)胞培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基中培養(yǎng)約30分鐘，以恢復(fù)其膜完整性。◆實驗結(jié)果使用什么儀器觀察？實驗結(jié)果可以通過流式細(xì)胞儀和熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，但更推薦使用流式細(xì)胞儀。因為正常的細(xì)胞和凋亡的細(xì)胞膜上都有磷脂酰絲氨酸（PS），只是凋亡細(xì)胞膜外更多，可以結(jié)合更多的Annexin V，流式細(xì)胞儀更靈敏，可以區(qū)分出微小差異，將正常細(xì)胞與凋亡細(xì)胞分成不同的兩群，但如果用熒光顯微鏡，可能觀察不到這一差別，尤其是貼壁細(xì)胞。若要在成像測定中檢測細(xì)胞凋亡，推薦使用SuperView? 488 Caspase-3 Assay Kit for Live Cells。◆流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡，結(jié)果圖中的各個象限代表什么狀態(tài)的細(xì)胞？左上角：Annexin V-/PI+，機(jī)械損傷細(xì)胞；右上角: AnnexinV+/PI+，晚期凋亡細(xì)胞或壞死；右下角：AnnexinV+/PI-，早期凋亡細(xì)胞；左下角：AnnexinV-/PI-，正常細(xì)胞。◆這款試劑盒可同時檢測出凋亡率和細(xì)胞周期分布嗎？不可以。檢測細(xì)胞凋亡時PI結(jié)合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于檢測細(xì)胞周期時需要只結(jié)合DNA，由于RNA的干擾，用細(xì)胞凋亡檢測試劑盒測出來的細(xì)胞周期不準(zhǔn)。同時，凋亡檢測與周期檢測時PI的工作濃度以及樣本處理都不一樣。 如果需要進(jìn)行細(xì)胞周期檢測，推薦Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）◆各象限代表的細(xì)胞狀態(tài)問題？Q1：(AnnexinV-染料)-/PI+，此區(qū)域的細(xì)胞為壞死細(xì)胞。也可能有少數(shù)的晚期凋亡細(xì)胞在其中，甚至機(jī)械損傷的細(xì)胞也包含其中。Annexin V-/PI+越多，實驗結(jié)果越不可信，建議實驗中盡量控制這一象限細(xì)胞比例。Q2: (AnnexinV+染料)+/PI+，此區(qū)域的細(xì)胞為晚期凋亡細(xì)胞或壞死。Q3：(AnnexinV-染料)+/PI-，此區(qū)域的細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞。Q4：(AnnexinV-染料)-/PI-，此區(qū)域的細(xì)胞為活細(xì)胞。

      ◆假陽性問題？1. 消化液中含有EDTA或消化時間過長引起的假陽性。Annexin V和PS的結(jié)合需要Ca2+，而EDTA是Ca2+螯合劑，使用含有EDTA的胰酶會造成假陰性。其次消化時間不宜過長，吹打細(xì)胞要輕柔，因為胰酶的過度消化和機(jī)械損傷都會引起細(xì)胞膜的損傷，造成假陽性。細(xì)胞消化下來后，建議在培養(yǎng)箱中在孵育30min，使細(xì)胞膜恢復(fù)完整性，避免假陽性，或者將細(xì)胞報訊在含2% BSA的PBS中，防止進(jìn)一步的損傷。2. 如果樣品來源于血液，必須去除血液中的血小板，因為血小板含有PS，能與Annexin V結(jié)合，干擾實驗結(jié)果。建議：可以含有EDTA的緩沖液200g離心去除血小板， 最后細(xì)胞多洗幾遍，減小EDTA螯合鈣離子產(chǎn)生的影響。3. 神經(jīng)細(xì)胞膜容易破壞外翻，導(dǎo)致假陽性，所以Annexin V/PI 雙染法流式檢測細(xì)胞凋亡不適用于神經(jīng)細(xì)胞。4. 誘導(dǎo)時間過長。一般情況下誘導(dǎo)幾個小時就可以出現(xiàn)早期凋亡，因此通常不需要處理大于48小時以上，誘導(dǎo)時間過長會使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)耗盡，導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)差，假陽性結(jié)果偏高。◆熒光染料選擇的問題？1. 實驗樣本是否帶熒光，因為感染病毒或質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞往往帶GFP熒光，GFP與YF488/FITC通道重疊，不能選擇YF488/FITC標(biāo)記的Annexin V，此時如果只有488 nm一根激光管可以用PE標(biāo)記Annexin V，用7-AAD代替PI，若有633 nm激光管，可以改用YF647 Annexin V代替YF488。2. 如果流式細(xì)胞儀帶有488 nm和633 nm兩個或以上激光管，首先考慮用APC或YF647標(biāo)記 Annexin V，因為它和PI通道幾乎不用考慮光重疊問題，可以減少調(diào)節(jié)補(bǔ)償?shù)臒溃绻挥?88 nm激光管則可選擇YF488/FITC標(biāo)記的Annexin V。3. 處理因素是否帶有熒光，本實驗室就碰到過一個促凋亡藥物Doxorubicin本身發(fā)紅色熒光，對PI通道的檢測造成嚴(yán)重干擾，而且濃度越大干擾越明顯。這時建議選用A6079或Y6102 。◆圈門問題？1.要特別注意在FSC/SSC圈門時，所選細(xì)胞范圍會對結(jié)果造成較大影響，所以在分析數(shù)據(jù)時，要把所有細(xì)胞都圈進(jìn)FSC/SSC的門內(nèi)，這樣實驗結(jié)果才會更可信。如圖，使細(xì)胞群大概位于對角線上，并且細(xì)胞群較集中，群內(nèi)細(xì)胞比例要在80%以上，如果細(xì)胞全部圈入，細(xì)胞比例才50%或者更低，說明細(xì)胞被壓在了坐標(biāo)軸上，這時要重新調(diào)節(jié)FSC和SSC。2.貼壁細(xì)胞做Annexin V凋亡檢測，通常分群不太規(guī)則，這時我們可以根據(jù)不加藥細(xì)胞來畫不規(guī)則的十字門。如上面圖形的設(shè)門方式：◆免疫染色與凋亡染色順序問題?Annexin V凋亡染色可以和抗體一起對細(xì)胞進(jìn)行染色嗎？可以，但建議Annexin V和其它抗體分開染色。例如Annexin V、PI和CD3、CD8同時標(biāo)記淋巴細(xì)胞，可以先在PBS中標(biāo)記CD3/CD8后洗去，再在Binding buffer（含鈣離子）中標(biāo)記Annexin V。◆這款試劑盒可同時檢測出凋亡率和細(xì)胞周期分布嗎？不可以。檢測細(xì)胞凋亡時PI結(jié)合的是核酸，包括DNA和RNA。而PI用于檢測細(xì)胞周期時需要只結(jié)合DNA，由于RNA的干擾，用細(xì)胞凋亡檢測試劑盒測出來的細(xì)胞周期不準(zhǔn)。同時，凋亡檢測與周期檢測時PI的工作濃度以及樣本處理都不一樣。 若果需要進(jìn)行細(xì)胞周期檢測，推薦Cell Cycle and Apoptosis Kit（C6031）◆固定、冷凍、切片或解離的組織，還可以做流式細(xì)胞分析嗎？不建議做流式細(xì)胞分析。因為流式細(xì)胞分析要求細(xì)胞分散、單個，活性好，這些狀態(tài)下的樣本外膜上的PS及膜的完整性都受到了影響，因此無法依賴膜的完整性區(qū)分健康細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。組織在凍存、復(fù)溫的過程中會有大量的細(xì)胞死亡，同時經(jīng)過這一過程的組織在分離成單個細(xì)胞的時候會形成許多細(xì)胞碎片，不宜上流式檢測，所以用于流式檢測的標(biāo)本最好是新鮮標(biāo)本，即取材后立即檢測，效果最好。 液氮保存的◆組織塊，可以將組織標(biāo)本進(jìn)行切片，然后做原位染色，觀察組織細(xì)胞的凋亡。◆Annexin V可以用在植物和細(xì)菌中嗎？Annexin V也可以用在植物和細(xì)菌中檢測凋亡，具體實驗步驟可參考相關(guān)文獻(xiàn)。

      使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：1.Iron Accumulation Leads to Bone Loss by Inducing Mesenchymal StemCell Apoptosis Through the Activation of Caspase3Ye YuanFei XuYan CaoLi XuChen YuFan YangPeng ZhangLiang WangGuangsi ShenJianrong WangYoujia XuBiological Trace Element Research(2018)434–441應(yīng)用方向：流式細(xì)胞儀檢測：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的凋亡2.鐵蓄積誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡并抑制成骨活性的研究袁曄, 張鵬王亮, 徐非, 俞晨, 楊帆, 張輝, 易劍橋, 徐又佳中華實驗外科雜志 (2017)1839-1842應(yīng)用方向：流式細(xì)胞儀檢測：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的凋亡3.Near-infrared upconversion–activated CRISPR-Cas9 system: A remote-controlled gene editing platformYongchun Pan, Jingjing Yang, Xiaowei Luan, Xinli Liu, XUEqing Li, Jian Yang, Ting Huang, Lu Sun, Yuzhen Wang.Science Advances(2019)應(yīng)用方向：流式細(xì)胞儀檢測：A549細(xì)胞的凋亡4.外泌體介導(dǎo)乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞對多柔比星耐藥性的機(jī)制張如月； 李朵璐； 楊哲； 郭金秀； 周玉冰藥學(xué)學(xué)報(2019)應(yīng)用方向：熒光顯微鏡凋亡檢測：MCF-7、MCF-7/Exo、MCF-7/Dox細(xì)胞的凋亡5.MS-275聯(lián)合順鉑對食管鱗狀細(xì)胞癌9706細(xì)胞氧化損傷和凋亡的影響劉騰飛,王亞蘋,李亞,張振坤,李喆,周馨魁,張璐玉,王文杰,劉紅濤,張彥婷,關(guān)方霞,馬珊珊鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院應(yīng)用方向：流式細(xì)胞儀檢測：食管鱗狀細(xì)胞癌(鱗癌) EC9706細(xì)胞的凋亡6.MS-275 combined with cisplatin exerts synergistic antitumor effects in human esophageal squamous cell carcinoma cellsTengfei Liu，F(xiàn)angxia Guan，Yaping Wang，Zhenkun Zhang，Ya Li，Yuanbo Cui，Zhe Li，Hongtao Liu，Yanting Zhang，Yuming Wang，Shanshan MaToxicology and Applied Pharmacology Volume 395, 15 May 2020, 114971

      7.Deformable liposomal codelivery of vorinostat and simvastatin promotes antitumor responsesthrough remodeling tumor microenvironmentBin Tu,Yang He,Binfan Chen,Yonghui Wang,Yanrong Gao,Mingjie Shi,Tuanbing Liu,Akmal M. Asrorov，Yongzhuo HuangBiomaterials Science
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