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螞蟻淘/Biotin TUNEL細胞凋亡試劑盒/20T/T6068S
  • 螞蟻淘/Biotin TUNEL細胞凋亡試劑盒/20T/T6068S

螞蟻淘/Biotin TUNEL細胞凋亡試劑盒/20T/T6068S

價格: ￥1105.00 市場價: 1841.67
貨號: T6068S
品牌: ebiomall
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      產(chǎn)品內(nèi)容

      組分

      6068S（20T）

      T6068L（50T）

      A. BiotinTUNEL Reaction Buffer

      1 mL

      2 × 1.25 mL

      B. TdT酶

      20 μL

      50 μL

      C. Streptavidin-HRP

      20 μL

      50 μL

      D. Streptavidin-HRP稀釋液

      1 mL

      2×1.25 mL

      E. DAB顯色液A

      100 μL

      250 μL

      F. DAB顯色液B

      1 mL

      2×1.25 mL

      G. DAB顯色液C

      50 μL

      125 μL

      H. Proteinase K (2 mg/mL)

      40 μL

      100 μL

      I. DNase I (2 U/μL)

      5 μL

      13 μL

      J. 10 × DNase I Buffer

      100 μL

      260 μL

      儲存條件本產(chǎn)品應(yīng)置于 -20℃ 儲存，組分 A、E、G需避光，避免反復(fù)凍融。有效期見外包裝。注：組分 A、E、F、G 使用時請佩戴口罩、手套，接觸皮膚，請立即用大量水沖洗。 產(chǎn)品介紹細胞凋亡的一個顯著特點是細胞染色體 DNA 的降解，這種降解非常特異并有規(guī)律，所產(chǎn)生的不同長度的 DNA 片段約為 180 bp-200 bp 的整數(shù)倍，表現(xiàn)為瓊脂糖凝膠電泳中呈現(xiàn)特異的梯狀 Ladder 圖譜，本試劑盒采用 TUNEL 法，應(yīng)用末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal DeoxynucleotidylTransferase, TdT）在凋亡細胞斷裂 DNA 的 3′-OH 末端催化摻入生物素（Biotin）標記的 dUTP (Biotin-X-dUTP)。隨后和辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的 Streptavidin(Streptavidin-HRP) 特異結(jié)合，最后在 HRP 的催化下通過DAB 顯色來顯示凋亡細胞，從而可以通過普通光學顯微鏡觀察并計數(shù)凋亡細胞。由于正常的或正在增值的細胞幾乎沒有 DNA 的斷裂，因而沒有 3′-OH 形成，很少能被染色。TUNEL 法可以選擇性的對凋亡細胞直接進行原位檢測，而非壞死細胞或因輻照和藥物治療而造成的 DNA 鏈斷裂的細胞，是一種更快速、直接的檢測手段。注意事項1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。2. 疊氮化鈉對 HRP 有抑制作用，實驗中請勿使用含有疊氮化鈉的試劑。
      說明書：UE-T6068S/T6068L
      MSDS：MSDS T6068 Biotin TUNEL Apoptosis Kit
      常見問題解答：◆為什么出現(xiàn)了一些非特異標記？

      1. 有些細胞或組織，比如平滑肌核酸酶或聚合酶活性水平較高，使得DNA全部被切斷，易導致假陽性。建議：取出細胞或組織后要立即固定并充分固定，以阻止這些酶的活性，同時設(shè)置陰性對照。2. 內(nèi)源性過氧化物酶影響，建議：對于肝臟、腎臟等血細胞含量多的組織，適當延長封閉時間和升高過氧化氫的濃度。3. 固定液濃度過高或過低，導致組織中心部分固定效果不佳，而使得中心部細胞自溶、DNA鏈出現(xiàn)不規(guī)則斷裂，產(chǎn)生假陽性。建議：推薦使用4%多聚甲醛。4. TdT 酶反應(yīng)時間過長或Tunel反應(yīng)過程中反應(yīng)液發(fā)生蒸發(fā)或滲漏，細胞或組織表面不能保持濕潤。注意控制反應(yīng)時間，并確保TdT 酶反應(yīng)液能很好地覆蓋樣品。5. 石蠟、脂肪、血液、體液等都較易與染料結(jié)合，所以組織切片制作時要保持干凈、脫蠟要徹底。6. 有些試劑或細胞存在自發(fā)熒光，選擇染料時要避開自發(fā)熒光的顏色。◆為什么沒有染上熒光？1. 固定不充分。固定液首選4%多聚甲醛，現(xiàn)用現(xiàn)配。不建議使用乙醇，乙醇固定液對組織的滲透力較弱，影響TUNEL標記效率.2. 細胞膜和核膜的通透不充分，TdT酶未能到達核內(nèi)。細胞與冰凍切片，可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30min，石蠟切片推薦使用蛋白酶K，37℃通透30 min；不同的細胞和組織所需要的通透時間略有不同，時間太長容易脫片，適當調(diào)整。3. 延長標記時間至2h，并適當增加TdT酶及dUTP的用量。4. 確定實驗對象細胞有凋亡。準備一份DNase I處理的陽性對照，驗證TdT酶反應(yīng)是否正確進行。◆如何對細胞核進行復(fù)染？可在TUNEL反應(yīng)結(jié)束后對細胞核進行染色。◆為什么熒光背景高？1. 支原體污染：可以使用支原體染色檢測試劑盒驗證。2. TdT 酶反應(yīng)時間過長，可以用試劑盒提供的TdT酶稀釋液將TdT酶稀釋2-5倍后再按照說明書操作，稀釋后的TdT酶僅供當日使用。3. 處于高速分裂和增殖狀態(tài)中的細胞，有時也會出現(xiàn)細胞核中的DNA 斷裂。建議：在非高增殖期取樣檢測；4. 有些試劑或細胞存在自發(fā)熒光，選擇染料時要避開自發(fā)熒光的顏色。5. DAB 孵育時間過長，減少DAB 染色時間。6. Biotin-X-dUTP 的非特異性結(jié)合，在TdT 酶反應(yīng)之后，再用含0.1% Triton X-100 和1 mg/ml BSA 的PBS 洗三次。◆標記率低？1. 乙醇、甲醇或甲醛（市面上購買的甲醛大多含有甲醇）固定的樣品標記效率較低（因為在固定時染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián)，而在操作中丟失），采用推薦的固定液。2. 固定時間過長，導致交聯(lián)程度過高，減少固定時間。3. 貼壁細胞如果使用藥物誘導凋亡，會細胞皺縮，貼壁黏附力降低，導致凋亡細胞容易脫落。建議：在凋亡誘導結(jié)束后，可以對多孔板進行1000g離心5min，然后再吸出培養(yǎng)基并用PBS洗滌。如果沒有適合的離心機，請注意操作輕緩，防止發(fā)生凋亡的細胞在洗滌時被洗去。后續(xù)整個操作也需要輕緩。◆在蛋白酶K中消化組織樣品多久？大部分組織樣品需要充分消化15分鐘。最佳的培養(yǎng)時間根據(jù)組織類型和厚度而不同。腦組織比其他組織需要更長的蛋白酶處理時間。◆實驗的組織切片應(yīng)該多厚？老鼠腸、腎臟、肝臟、心臟和結(jié)腸厚度5–20 μm。

      使用本產(chǎn)品的文獻：參考文獻1.Enhanced anti-tumor activity by the combination of TRAIL/Apo-2L and combretastatin A-4 against human colon cancer cells via induction of apoptosis in vitro and in vivo.應(yīng)用方向：檢測結(jié)腸癌細胞的凋亡2.Antiproliferation and cell apoptosis inducing bioactivities of constitUEnts from Dysosma versipellis in PC3 and Bcap-37 cell lines.應(yīng)用方向：檢測人前列腺癌細胞株P(guān)C3、乳腺癌細胞株Bcap-37、胃癌細胞株BGC-823的凋亡3.Caudatin-2,6-dideoxy-3-O-methy-β-D-cymaropyranoside 1 induced apoptosis through caspase 3-dependent pathway in human hepatoma cell line SMMC7721.應(yīng)用方向：檢測人肝癌細胞系SMMC7721的凋亡4.Chemical constitUEnts of the ethyl acetate extract of Belamcanda chinensis (L.) DC roots and their antitumor activities.應(yīng)用方向：檢測PC3、MGC-803、Bcap-37和MCF-7細胞系的凋亡5.Synthesis and cytotoxicity of novel ursolic acid derivatives containing an acyl piperazine moiety.應(yīng)用方向：檢測胃癌細胞MGC-803和乳腺癌細胞Bcap-37的凋亡
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